Il super cattivo Gru, divenuto un agente dell’Anti-Villain League, è pronto ad affrontare una nuova avventura insieme a sua moglie Lucy, e alle loro tre figlie adottive, Margo, Edith e Agnes. C’è un nuovo membro in famiglia: Gru Jr., figlio naturale di Gru e Lucy, il cui passatempo preferito è tormentare e far disperare suo padre.
L’intera famiglia, però, si ritroverà costretta a fuggire, quando verrà presa di mira da un criminale il fuga, Maxime Le Mal e dalla sua fidanzata, la femme fatale Valentina.